معلومة

عزل البروتين من خلايا الثدييات


ما هو المخزن المؤقت غير SDS الذي يمكنني استخدامه لعزل البروتين من خلايا الثدييات؟ البروتين مخصص لاختبار معقدات سلسلة نقل الإلكترون.


إجابة قصيرة - سوف تحتاج إلى استخدام منظف غير أيوني. ستذيب هذه الأغشية الدهنية ولكنها تترك معظم مجمعات البروتين سليمة والعديد من البروتينات في شكل نشط.

ومع ذلك ، هناك العديد من هذه الأشياء المتاحة وإيجاد الشخص المناسب لوظيفة معينة هو فن أسود.

النهج المعتاد هو البدء بشيء مستخدَم على نطاق واسع وغير مكلف للغاية مثل Triton X-100. تُستخدم المنظفات التي تحتوي على مجموعات رأس الجليكوسيد على نطاق واسع ولكنها تميل إلى باهظة الثمن.


أساسيات هندسة التكنولوجيا الحيوية

2.32.5 التعبير غير المتجانس عن البروتين في ثقافة خلايا الثدييات

تعد خلايا الثدييات حاليًا المضيف المفضل للتعبير عن البروتينات غير المتجانسة حقيقية النواة المعقدة ، والتي تتطلب طيًا مناسبًا أو تجميعًا متعدد القوالب ، أو تتطلب PTMs "أصيلة" تشبه الإنسان مثل الارتباط بالجليكوزيل المناسب. وبسبب هذا ، يتم إنتاج حوالي 60-70٪ من جميع الأدوية المؤتلفة في خلايا الثدييات. الخلية الثديية الأكثر شيوعًا هي خلية مبيض الهامستر الصيني (CHO) المخلدة ، ولكن تمت الموافقة على عدد من الخطوط الأخرى لإنتاج البروتينات الصيدلانية الحيوية بما في ذلك كلية الهامستر للأطفال (BHK) ، كلية الجنين البشري (HEK) ، المايلوما الفأرية (NS0) ) وخلايا الشبكية البشرية (انظر المراجع 16 و 17).

تتمثل الطريقة الأكثر شيوعًا لتوليد خطوط خلايا CHO المحولة بشكل ثابت في البدء بسلالة CHO المضيفة التي تكون ناقصة في كليهما ظفر الأليلات ، وهو جين يرمز إلى اختزال ثنائي هيدروفولات (DHFR). تتطلب خلايا DHFR ناقص CHO إضافة الجلايسين ، والهيبوكسانثين ، والثيميدين (GHT) في الوسط للنمو. الجين غير المتجانسة و ظفر ثم يتم استنساخ الجين في نواقل تعبيرية مفردة أو منفصلة للثدييات (انظر المراجعة بواسطة Yin وآخرون. [2] للحصول على قائمة حديثة من النواقل المتاحة تجاريًا) ونقلها إلى خط المضيف. يختلف الموقع ورقم نسخة البلازميد المتكامل بين الخلايا المنقولة ، والتي يتم تحديدها على وسيط GHT ناقص. نتيجة لذلك ، سيختلف معدل النمو والتعبير عن البروتين غير المتجانسة بسبب التأثيرات الموضعية وعدد النسخ ، لذلك يتم فحص المئات من خطوط الخلايا المستقلة المنقولة بشكل عام لتحديد المرشحين الواعدين لتطوير العمليات الحيوية وتوسيع نطاقها. علامة أخرى يمكن اختيارها هي مركب الجلوتامين (gs) الجين ، مع الاختيار على وسيط بدون جلوتامين. تم اختيار خطوط تعبير أعلى عن طريق إضافة مواد كيميائية تمنع النشاط الأنزيمي لأنزيم الواسم (يضاف الميثوتريكسات لنظام DHFR ويضاف ميثيونين سلفوكسيمين لنظام GS) ، حيث من المحتمل أن يكون للخلايا الباقية مستويات تعبير أعلى من اختيار جينات العلامة ، ويفترض ، الترميز الجيني المجاور للمنتج محل الاهتمام.

ميزة إضافية لخلايا الثدييات هي القدرة على إفراز منتجات بروتينية معقدة ومتعددة القوالب ومطوية بشكل صحيح ، مثل الأجسام المضادة. تزرع مزارع الخلايا الثديية بشكل روتيني في مفاعلات حيوية من الفولاذ المقاوم للصدأ على نطاق واسع كمزارع معلقة ، عادةً في مزارع دفعية ممتدة مع إضافة متوسطة إما بشكل شبه مستمر أو على دفعات صغيرة ، ويتم إفراز البروتينات غير المتجانسة في مرق الاستزراع ، مما يسهل الاستعادة والمعالجة النهائية . نظرًا لأن خلايا الثدييات قادرة على نشر فيروسات الثدييات ، فإن التطهير الفيروسي يعد خطوة أساسية في إنتاج العلاج الحيوي ، جنبًا إلى جنب مع إزالة الحمض النووي للخلية المضيفة بسبب التلوث المحتمل للحمض النووي المسرطنة. على مدار العشرين عامًا الماضية ، كانت هناك تحسينات كبيرة في إنتاجية البروتينات غير المتجانسة باستخدام زراعة خلايا الثدييات. تشير التقديرات إلى أن عيارات المنتج قد ارتفعت أكثر من 100 ضعف ، بدءًا من -50 مجم لتر -1 في منتصف الثمانينيات إلى المستويات الحالية التي تصل إلى 3-5 جم لتر -1 [17]. وبالمثل ، زادت الإنتاجية النوعية بحوالي 25 ضعفًا من 0.006 إلى 0.15 جم لتر يوميًا -1. وتعزى هذه التحسينات في المقام الأول إلى الصيغ المتوسطة المحسنة ، واستراتيجيات تشغيل العمليات الحيوية ، والتحكم في العملية.

في حين تم إحراز تقدم كبير في إنتاجية خلايا CHO ، إلا أن هناك ثلاثة تحديات رئيسية على الأقل: (1) انخفاض في إنتاج البروتين غير المتجانسة على مدى أطر زمنية طويلة / ممرات متعددة ، (2) انخفاض الإنتاجية عند كثافة الخلايا العالية ، و (3) الأطر الزمنية الطويلة المطلوبة للانتقال من الجينات إلى المنتج. يعد استقرار إنتاج البروتين المؤتلف سمة مهمة لخط الإنتاج ، حتى بالنسبة لعملية الاستزراع الدفعي التي تبدأ بخلايا من بنك الخلايا العاملة ، حيث يلزم وجود عدة ممرات في قطار تخمير البذور قبل تلقيح مخمر الإنتاج. يمكن أن ينتج انخفاض الإنتاجية عن إسكات الجينات (التدهور المحدد لمنتج الرنا المرسال) أو تعديلات الخلايا المضيفة على الجينات المحورة. على سبيل المثال ، في سلالات الخلايا المأشوبة CHO-DG44 ، فقط 15-20٪ من السلالات المنقولة لديها مستوى ثابت من إنتاج البروتين بعد 6 أشهر. وبالتالي ، فإن أحد الأهداف أثناء عملية الفرز الشاملة هو تحديد الخلايا ذات خصائص الإنتاج المستقرة بالإضافة إلى معدل النمو المرتفع وإنتاجية المنتج العالية. تشمل الاستراتيجيات التي تم استخدامها لتقليل إسكات الجينات اختيار محفز مناسب واستهداف الجين المحور لمناطق معينة في الكروموسوم ، بما في ذلك عناصر الحمض النووي مثل مناطق ربط السقالة / المصفوفة في البناء ، أو العناصر المضادة للضغط ، أو عناصر فتح الكروماتين في كل مكان [16] .

التحدي الآخر الذي يواجه زراعة خلايا الثدييات هو وقت تطوير العملية الطويل المطلوب. تستغرق عمليات نقل الجينات ، والفحص ، وتطوير عملية المفاعلات الحيوية لزراعة خلايا الثدييات ما لا يقل عن 12 شهرًا [17]. في الآونة الأخيرة ، تم إثبات التعبير الجيني العابر في مزارع خلايا الثدييات. في هذه العملية ، تزرع خلايا الثدييات (CHO أو HEK-293) في مفاعل حيوي ، ويتم إدخال الناقل المؤتلف (غير الفيروسي) في الخلايا باستخدام طريقة تعداء كيميائية مثل فوسفات الكالسيوم أو بولي إيثيلينيميني. في ظل الظروف المناسبة ، تتم عمليات النسخ المؤقت والترجمة والمعالجة اللاحقة للترجمة في الخلايا المضيفة في إطار زمني قصير (من 1 إلى 14 يومًا). على الرغم من أن عوائد إنتاج البروتين المنخفضة ، وإمكانية التكاثر ، والتوسع كانت تحديات للتعبير الجيني العابر في مزارع خلايا الثدييات ، إلا أنه نهج واعد للتطبيقات التي يكون فيها الوقت بين تحديد الجينات والمنتج أمرًا بالغ الأهمية. في الآونة الأخيرة ، من خلال تحسين طريقة تعداء العدوى ونواقل الجينات ، تم تحقيق عيار منتج الجسم المضاد المؤتلف حتى 860 مجم لتر −1 على مقياس 2 لتر باستخدام التعبير الجيني العابر في خلايا HEK-293 في 14 يومًا [18].

باختصار ، على الرغم من كفاءة خلايا الثدييات في قدرتها على إنتاج بروتينات غير متجانسة تلبي مواصفات جودة المنتج المطلوبة ، فإن عمليات زراعة خلايا الثدييات القائمة على المفاعلات الحيوية هي بطبيعتها أكثر تعقيدًا وتكلفة وتستغرق وقتًا طويلاً.


يتم تنقية بروتين الميوسلين كامل الطول من خلايا الثدييات باعتباره ثنائي مرئي

Myocilin (MYOC) هو بروتين مُفرَز يوجد في الخلط المائي للإنسان (AH) والطفرات في جين MYOC هي الطفرات الأكثر شيوعًا التي لوحظت في مرضى الجلوكوما. يشير تحليل AH Human الذي تم تحليله في ظل ظروف غير مختصرة إلى أن MYOC لا يتم العثور عليه بشكل طبيعي في شكل أحادي ، بل هو في الغالب ثنائي الأبعاد. على الرغم من الإبلاغ عن MYOC لأول مرة منذ ما يقرب من 20 عامًا ، إلا أن التحدي التقني الذي لا يزال يواجهه الباحثون هو عدم القدرة على عزل بروتين MYOC كامل الطول لأغراض تجريبية. هنا نصف طريقتين لعزل كميات كافية من بروتين MYOC كامل الطول البشري من خلايا الثدييات. تضمنت إحدى الطرق تحديد خط الخلية (HeLa S3) الذي يفرز بروتينًا كامل الطول (15 مجم / لتر) بينما تضمنت الطريقة الثانية نهج تنقية من 293 خلية تتطلب تحديد وتعديل موقع انقسام MYOC داخلي (Glu214 / Leu215 ). تم تحسين إنتاج بروتين MYOC من 293 خلية عن طريق تحور اثنين من السيستين الطرفي N MYOC (C47 و C61) إلى السيرينات. أشارت كروماتوغرافيا استبعاد الحجم التحليلي لبروتين MYOC كامل الطول المنقى من 293 خلية إلى أنه في الغالب قاتم ونقترح هيكلًا لـ MYOC dimer. نأمل أنه من خلال توفير طرق للحصول على بروتين MYOC ، سيتمكن الباحثون من استخدام البروتين للحصول على رؤى جديدة في بيولوجيا MYOC. الهدف النهائي لأبحاث MYOC هو فهم هذا الهدف بشكل أفضل حتى نتمكن من مساعدة المريض الذي يحمل طفرة MYOC على الاحتفاظ بالرؤية والحفاظ على جودة الحياة.

الكلمات الدالة: Dimer الخلط المائي البشري هيكل نموذجي Myocilin عزل البروتين تنقية البروتين.


الكواشف والحلول

المخزن المؤقت لعزل النوى 1 (NIM1)

يتم استخدام هذا المخزن المؤقت لإعداد NIM2 ، والذي يستخدم لصنع HB (الخطوة 2 ، البروتوكول الأساسي 2). استعد مقدمًا ، وخلط المكونات المذكورة أدناه ، وخزن لمدة تصل إلى 6 أشهر عند 4 درجات مئوية. يجب تعديل الأحجام بناءً على عدد العينات التي تتم معالجتها.

المخزن المؤقت لعزل النوى 1 (NIM1)
مكون حجم (ميكرولتر) التركيز النهائي (مم)
لعينة واحدة
1.5 م سكروز 625 250
(سيجما الدريتش ، القط رقم S0389)
2 م بوكل 46.875 25
(Thermo Fisher Scientific، cat. no. AM9640G)
1 م مجكل2 18.75 5
(Thermo Fisher Scientific، cat. no. AM9530G)
1 م Tris‧Cl ، الرقم الهيدروجيني 8 37.5 10
(Thermo Fisher Scientific، cat. no. AM9855G)
مياه خالية من نوكلياز 3021.88
المجموع 3750

المخزن المؤقت لعزل النوى 2 (NIM2)

يتم استخدام هذا المخزن المؤقت لإعداد HB (الخطوة 2 ، البروتوكول الأساسي 2). تحضير طازج ، ومزج المكونات المذكورة أدناه ، والاحتفاظ بالثلج. يتم حساب هذه الأرقام بحيث يكون هناك حجم احتياطي متاح ، إذا لزم الأمر. اضبط وفقًا لعدد العينات التي تتم معالجتها.

المخزن المؤقت لعزل النوى 2 (NIM2)
مكون حجم (ميكرولتر) التركيز النهائي (مم)
لعينة واحدة
NIM1 (انظر الوصفة) 1246.25
1 مم DTT 1.25 1 ميكرومتر
(Thermo Fisher Scientific ، القط رقم P2325)
50 × مثبط البروتياز 25
(روش ، القط رقم 11873580001)
المجموع 1250

عازلة التجانس (HB)

تحضير طازج ، ومزج المكونات المذكورة أدناه ، والاحتفاظ بالثلج. يتم حساب هذه الأرقام بحيث يكون هناك حجم احتياطي متاح ، إذا لزم الأمر. اضبط وفقًا لعدد العينات التي تتم معالجتها. انظر الجدول أدناه.

عازلة التجانس
مكون الحجم (ميكرولتر) لـ التركيز النهائي (مم)
1 عينة
NIM2 (انظر الوصفة) 1212.5
40 وحدة / ميكرولتر 12.5 0.4 وحدة / ميكرولتر
(Thermo Fisher Scientific، cat. no. AM2684)
20 وحدة / ميكرولتر 12.5 0.2 وحدة / ميكرولتر
(Invitrogen ، القط رقم AM2696)
10٪ (حجم / حجم) Triton X-100 12.5 0.10%
(سيجما الدريتش ، القط رقم T8787-100ML)
المجموع 1250

المخزن المؤقت للتخزين (SB)

تحضير طازجة والاحتفاظ بها على الجليد. يتم حساب هذه الأرقام بحيث يكون هناك حجم احتياطي متاح ، إذا لزم الأمر. اضبط وفقًا لعدد العينات التي تتم معالجتها. انظر الجدول أدناه.

المخزن المؤقت للتخزين
مكون حجم (ميكرولتر) لـ التركيز النهائي (مم)
1 عينة
المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS1 × Invitrogen ، القط رقم 10010-049) 995
ألبومين مصل الأبقار (BSA Sigma-Aldrich ، القط رقم A4503-10G) 40 مجم 4%
40 يو / ميكرولتر حامي RNaseIn 5 0.2 وحدة / ميكرولتر
(سيجما الدريتش ، القط رقم 03335402001)
المجموع 1000

إنتاج البروتينات عبر الغشاء المؤتلف من خلايا الثدييات من أجل التحليلات الكيميائية الحيوية والإنشائية

وحدة البيولوجيا الهيكلية والكيميائية للبروتينات الغشائية وعلوم الأعصاب وقسم البيولوجيا الخلوية والهيكلية (NCSBD) ، معهد يونيس كينيدي شرايفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية (NICHD) ، المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ، بيثيسدا ، ماريلاند

وحدة البيولوجيا الهيكلية والكيميائية للبروتينات الغشائية وعلوم الأعصاب وقسم البيولوجيا الخلوية والهيكلية (NCSBD) ، معهد يونيس كينيدي شرايفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية (NICHD) ، المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ، بيثيسدا ، ماريلاند

وحدة البيولوجيا الهيكلية والكيميائية للبروتينات الغشائية وعلوم الأعصاب وقسم البيولوجيا الخلوية والهيكلية (NCSBD) ، معهد يونيس كينيدي شرايفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية (NICHD) ، المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ، بيثيسدا ، ماريلاند

وحدة البيولوجيا الهيكلية والكيميائية للبروتينات الغشائية وعلوم الأعصاب وقسم البيولوجيا الخلوية والهيكلية (NCSBD) ، معهد يونيس كينيدي شرايفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية (NICHD) ، المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ، بيثيسدا ، ماريلاند

وحدة البيولوجيا الهيكلية والكيميائية للبروتينات الغشائية وعلوم الأعصاب وقسم البيولوجيا الخلوية والهيكلية (NCSBD) ، معهد يونيس كينيدي شرايفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية (NICHD) ، المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ، بيثيسدا ، ماريلاند

وحدة البيولوجيا الهيكلية والكيميائية للبروتينات الغشائية وعلوم الأعصاب وقسم البيولوجيا الخلوية والهيكلية (NCSBD) ، معهد يونيس كينيدي شرايفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية (NICHD) ، المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ، بيثيسدا ، ماريلاند

الملخص

بروتينات الغشاء المتكاملة حقيقية النواة هي مكونات رئيسية في العمليات البيولوجية المختلفة. نظرًا لأنها متورطة في أمراض متعددة ، فمن المهم فهم آلية عملها من خلال توضيح هيكلها ووظيفتها. تحد التحديات التقنية المعقدة المرتبطة بتوليد بروتينات الغشاء المؤتلف بشدة من قدرتنا على فهمها باستخدام الأساليب الهيكلية والكيميائية الحيوية. هنا ، نقدم إجراءً مفصلاً لمعالجة وتخفيف الصعوبات التي ينطوي عليها التعبير المفرط غير المتجانسة على نطاق واسع وتنقية بروتينات الغشاء حقيقية النواة باستخدام HEK293S GnTi - الخلايا المنقولة بالفيروس البكتيري. يتم تقديم نوعين من البروتينات البشرية ، hDHHC15 و hPORCN ، كأمثلة ، مع إرشادات خطوة بخطوة لترنسفكأيشن عابر وتوليد فيروسات باكول ، متبوعًا بإفراط في التعبير والتنقية من خلايا HEK293S GnTi. © 2020 وايلي الدوريات ذ.

البروتوكول الأساسي 1: تعبير بروتيني صغير الحجم في خلايا HEK293T في الثدييات

البروتوكول الأساسي 2: توليد الفيروس البكتيري من خلايا Sf9 (الحشرات)

بروتوكول بديل: طريقة خالية من التعداد لتوليد P2 مخزون فيروسي

بروتوكول الدعم 1: نقل خلايا HEK293T على نطاق صغير مع P.2 باكولوفيروس

البروتوكول الأساسي 3: نقل فيروسي واسع النطاق لخلايا HEK293S GnTi

بروتوكول الدعم 2: تحضير غشاء واسع النطاق من خلايا HEK293S GnTi

البروتوكول الأساسي 4: تنقية البروتينات الغشائية على نطاق واسع من خلايا HEK293S GnTi


تنقية الحمض النووي من عينات الثدييات

عرضت مجموعة من المجموعات لعزل الحمض النووي الجيني من مجموعة واسعة من عينات الثدييات ، بما في ذلك الأنسجة والدم وذيل الفأر.

OmniPrep & trade عزل الحمض النووي الجينومي ، OmniPrep & trade للدم ، OmniPrep & trade للأنسجة و OmniPrep & trade لمجموعات عزل ذيل الماوس تعتمد على تقنية الترسيب السريع التي تستخدم كواشف ترسيب فريدة لعزل الحمض النووي الجيني الخالي من البروتينات والحمض النووي الريبي.

تقوم شركة MegaLong & trade بعزل النوى تحت ظروف استخلاص معتدلة وتطلق الحمض النووي الجيني عن طريق هضم البروتينات النووية مع بروتين LongLife & trade Proteinase K. النشط للغاية. التلاعب وهو أحد الأسباب الرئيسية لكسر الحمض النووي.

GET & trade Template and GET & trade يستند DNA Template-Mag إلى تقنية كفاءة الجينوم (GET) المصممة لتنقية قوالب الحمض النووي من عينات صغيرة من أنواع عينات متنوعة. يعتمد على استخدام محلول التحلل الجيني عالي الكفاءة للخلايا المتحللة متبوعًا بتثبيت الأحماض النووية على عمود دوران السيليكا أو حبيبات السيليكا المغناطيسية. ويتبع ذلك خطوات الغسيل والشطف للحصول على DNA جيني عالي الجودة.

تم تصميم OmniTemplate & trade خصيصًا للعزل السريع لقالب DNA في أنبوب واحد لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من عينات أنسجة الثدييات ومزارع الدم والخلايا.


مساحيق وي اند واي | الإنتاج والاستخدامات

عزل وتجزئة البروتين

على النقيض من ترسيب بروتينات مصل اللبن عن طريق المعالجة الحرارية في تصنيع lactalbumin ، تهدف منهجيات عزل البروتين والتجزئة إلى فصل البروتينات عن مصل اللبن في مثل هذا الشكل بحيث تظل ، قدر الإمكان ، غير مبطنة تمامًا وبالتالي تحتفظ بوظيفتها. تحتوي هذه المنتجات (مركزات وعزلات البروتين) على نسبة عالية من البروتين ويمكن أن يكون لها خصائص وظيفية استثنائية ذات قيمة كبيرة لصناعة الأغذية.

تحتوي مركزات البروتين على بروتينات مصل اللبن بنفس النسب الموجودة في مصل اللبن. (لاحظ أنه في هذه المقالة ، يتم استخدام مصطلح `` مركزات البروتين '' للمنتجات عالية البروتين التي تحتوي على بروتينات مصل اللبن الفردية بنفس النسبة تقريبًا الموجودة في مصل اللبن ، ويستخدم مصطلح `` مركز بروتين مصل اللبن '' لمثل هذه المنتجات المصنعة عن طريق الترشيح الفائق ، وتستخدم المصطلحات "عزلات البروتين" و "أجزاء البروتين" للإشارة إلى المنتجات عالية البروتين التي تحتوي على نسبة أعلى من بروتين معين من تلك الموجودة في مصل اللبن.) يتم تصنيع مركزات البروتين هذه عمومًا باستخدام ماص غير محدد لربط البروتينات في مصل اللبن ، يليه شطف البروتينات عن طريق معالجة المادة الماصة باستخدام شطف معين. تشتمل المواد الماصة التي تم استخدامها تجاريًا على كربوكسي ميثيل سلولوز ومجموعة من أكاسيد المعادن. على الرغم من أن هذه المواد الماصة غير محددة نسبيًا ، إلا أنها يمكن أن تُظهر تفضيلًا لربط بروتينات معينة في ظل ظروف معينة من الأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة والقوة الأيونية. وبالتالي ، يمكن استخدام هذه العمليات لإنتاج عزلات بروتينية ، على سبيل المثال مع نسبة أعلى من β-lactoglobulin إلى α-lactalbumin من تلك الموجودة في مصل اللبن.

تتطور أيضًا تقنية تجزئة البروتين ، والتي تعتمد على فصل α-lactalbumin من β-lactoglobulin على أساس قابليتها للذوبان المختلفة في ظل ظروف محددة من الأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة والقوة الأيونية. لذلك من الممكن ، على سبيل المثال ، فصل معظم α-lactalbumin عن مصل اللبن عن طريق التلاعب الدقيق بظروف المعالجة. كلا من α-lactalbumin الذي تم ترسيبه والبروتين القابل للذوبان المتبقي (في الغالب β-lactoglobulin) غير مبطل نسبيًا وبالتالي يحتفظان بوظائفهما العالية. الظروف المستخدمة في هذه العمليات خفيفة للغاية ولا تؤدي إلى أي تمسخ لبروتينات مصل اللبن. مع مثل هذه العمليات ، من الممكن بالتالي إنتاج عزلات غنية بـ β-lactoglobulin (مع قوة هلامية عالية للغاية) و α-lactalbumin (منتج قد يكون له إمكانات كبيرة في أغذية الأطفال غير المسببة للحساسية).


خيارات الوصول

احصل على حق الوصول الكامل إلى دفتر اليومية لمدة عام واحد

جميع الأسعار أسعار صافي.
سيتم إضافة ضريبة القيمة المضافة في وقت لاحق عند الخروج.
سيتم الانتهاء من حساب الضريبة أثناء الخروج.

احصل على وصول محدود أو كامل للمقالات على ReadCube.

جميع الأسعار أسعار صافي.


أنظمة استخلاص البروتين وتحلل الأمبير (PE LB ™)

تضمن أنظمة استخلاص البروتين وتحلل الأمبير (PE LB & trade) استردادًا جيدًا للبروتين ، مع الحفاظ على النشاط البيولوجي للبروتينات. البروتينات المذابة مناسبة لفحوصات الإنزيم ، الرحلان الكهربائي ، دراسات الطي ، دراسات الكروماتوغرافيا والعديد من التطبيقات النهائية.

تقدم أنظمة PE LB & trade مجموعة واسعة من المحاليل المنظمة لتحلل واستخراج البروتينات من البكتيريا والخميرة وخلايا الثدييات وأنسجة الثدييات. تعتمد أنظمة PE LB والتجارة على مزيج خاص من عوامل التخزين المؤقت العضوية والمنظفات الخفيفة غير الأيونية ومجموعة من الأملاح المختلفة لتعزيز استخراج البروتينات والحفاظ على استقرار الأنشطة البيولوجية للبروتينات.

لتكملة هذه العائلة من المخازن المؤقتة للتحلل والاستخراج ، قمنا بتحسين ProteaseArrest TM و Protease-PhosphataseArrest. ستحمي مثبطات الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز البروتينات التي تهمك من التدهور وهي متوافقة مع جميع مخازن التحلل لدينا.


الاستخراج المتزامن للبروتينات والمستقلبات من الخلايا في المزرعة

يعد الإعداد الصحيح للعينة جزءًا لا يتجزأ من جميع مناهج omics ، ويمكن أن يؤثر بشكل كبير على نتائج عدد كبير من التحليلات. نظرًا لأن مناهج البحث في علم الأيض والبروتينات غالبًا ما تسفر عن معلومات تكميلية ، فمن المستحسن أن يكون لديك إجراء تحضير عينة يمكن أن ينتج عنه معلومات لكلا النوعين من التحليلات من نفس مجتمع الخلية. يشرح هذا البروتوكول طريقة لفصل وعزل المستقلبات والبروتينات من نفس العينة البيولوجية ، من أجل استخدامها في المصب في تحليلات الأيض والبروتينات في وقت واحد. بهذه الطريقة ، يمكن دراسة مستويين مختلفين من التنظيم البيولوجي في عينة واحدة ، مما يقلل التباين الذي قد ينتج عن تجارب متعددة. يمكن استخدام هذا البروتوكول مع كل من ثقافات الخلايا الملتصقة والمعلقة ، كما يتم تفصيل استخراج المستقلبات من الوسط الخلوي ، بحيث يمكن تحديد كمية امتصاص الخلايا وإفراز المستقلبات.

تشمل مزايا هذه التقنية ما يلي: 1.

هذه الطريقة غير مكلفة وسريعة الأداء ولا تتطلب أي مجموعات.

يمكن استخدامه على أي خلايا في المستنبت ، بما في ذلك خطوط الخلايا والخلايا الأولية المستخرجة من الكائنات الحية.

يمكن استخدام مجموعة متنوعة من تقنيات التحليل المختلفة ، مما يضيف قيمة إضافية إلى بيانات الأيض التي تم تحليلها من عينة تعتبر ذات قيمة عالية في بيولوجيا الأنظمة التجريبية.


شاهد الفيديو: Protein purification عزل البروتين. بالعربى (كانون الثاني 2022).